卿彬菊, 郭 敏, 刘海宁, 叶秀深, 李 权, 葛 飞, 吴志坚
中国科学院青海盐湖研究所,青海西宁
中国科学院研究生院,北京
摘 要:本文建立了双波长分光光度法测定乳浊液中烈香杜鹃油的分析方法,烈香杜鹃油含量在0. 005～0. 8 g?L - 1 的范围内线性关系良好( R = 0. 9999 , n = 9) ,平均回收率为99. 92 % ,相对标准偏差为1. 64 %。该测定方法简便快速,结果准确,为性质相似的其它油性药物在乳浊液中含量的分析测定提供了参考。
关键词:烈香杜鹃油;双波长;分光光度法;乳浊液
中图分类号:O657. 39 文献标识码:A 文章编号
烈香杜鹃为杜鹃花科杜鹃属植物,主要分布在我国青海、甘肃、陕西、四川等地。烈香杜鹃叶所含挥发油对慢性气管炎有较好疗效,具有清热解毒,止咳平喘,解痉行气,健胃消肿之功效,且毒性小,副作用少。
烈香杜鹃油(Savoury Rhododendron Oil ,SRO) 成分复杂,能与乙醇互溶,极难溶于水,通常采用挥发油测定法[ 1 ] 进行测定,但方法比较繁琐,时间冗长。在杜鹃油的使用及药效评估过程中,需要知道杜鹃油在水乳浊液中的含量。
目前尚未见用分光光度法测定杜鹃油在水乳浊液中含量的报道。本文发挥紫外2可见分光光度法快速简捷的特点,建立用分光光度法测定杜鹃油在水乳浊液中含量的方法,这对于杜鹃油在水乳浊液中含量的快速测定,杜鹃油缓释制剂可控释放性能的研究有重要意义,而且所建立的方法对于性质相似的其它油性药物在水乳浊液中含量的快速分析测定有一定的参考价值。
实验部分
仪器及材料
型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司) ; KQ5200 型超声清洗器(40 kH ,200W ,昆山市超声有限公司) 。
吐温280 为化学纯;氢氧化钠、盐酸和氯化钠均为分析纯。实验用水为重蒸水。烈香杜鹃油(青海大地药业有限公司) ,相对密度为0. 93～0. 98 g/ L 。
实验方法
杜鹃油不溶于水,为了在水中分散杜鹃油,需要加入表面活性剂,形成乳浊液,才能用光谱法测定杜鹃油含量。T280 为比较常用的药物添加剂和药物可控释放调节剂[ 223 ] ,在本实验中选用T280 分散水中的杜鹃油。为了进一步促进杜鹃油在水中的分散,用KQ5200 型超声清洗器(40 kH ,200 W) 对乳浊液进行超声处理,考察超声与未超声样品的光谱性质及吸光度的稳定性。
以NaCl调节乳浊液的离子强度,考察离子强度对吸光度的影响;以盐酸或氢氧化钠溶液调节乳浊液的p H 值,考察p H 值对吸光度的影响。
在确定了基本的测定条件之后,配制杜鹃油含量不同的一系列乳浊液,得到标准曲线,最后确定测定方法的回收率和精密度。
结果与讨论
超声处理对吸光度的影响
配制含杜鹃油0. 27 g?L - 1 、吐温0. 17 g?L - 1 的乳浊液(未加酸、碱及盐调节p H 值及离子强度) ,取50mL 于100 mL 玻璃瓶中,置于40 kH、200 W 的超声清洗器中,超声20 min 。对超声及未超声样品进行紫外2可见光谱扫描,结果如图1 所示。结果表明,超声处理对吸光度有一定的影响,超声后吸光度减小。
体系的稳定性
超声及未超声样品在300 nm 处的时间扫描结果见图2 。未超声样品的吸光度随放置时间的增加而减小,而超声样品的吸光度随放置时间的变化不大。样品经过超声处理之后吸光度更稳定,更适合于光谱分析,因而在以下的实验中都对样品进行超声处理20 min ,超声后将样品放置120 min 后进行测定。
离子强度对吸光度的影响
离子强度对吸光度有一定的影响。在定量分析时,为了得到更准确的结果,应该使标准样与待测样具有相同或相近的组成,并保持相同或相近的离子强度。在后面的实验中,不再加盐调节离子强度。
pH值对吸光度的影响
实验显示p H 值对吸光度有一定影响,当p H 值过低或过高时吸光度均较低,分析结果灵敏度变差。
在不加盐酸及氢氧化钠的情况下,乳浊液的p H 值为5. 1 ,在该p H 值下,比较适合进行光谱分析。在后续的实验中,不再加盐酸或氢氧化钠调节乳浊液的p H 值。
T280 用量的影响
当杜鹃油的质量达到T280 质量的3 倍以上时,加入水中后,不易形成均匀的乳浊液,有一部分杜鹃油浮于水面,影响测定的准确度。在分析测定的过程中, T280 的用量应该至少保证能形成均匀的乳浊液。由于在杜鹃油含量的实际测定中,采用了双波长分光光度法,能消除T280 的影响, T280 的用量没有必要严格控制。不过,在保证能形成均匀乳浊液的前提下,应该尽量少加T280 。
测定波长的选择
图3 为0. 17 g/ L T280 溶液和由杜鹃油、T280 与水构成的乳浊液(杜鹃油和T280 浓度分别为0. 12 和0. 10 g/ L) 的紫外2可见光谱。T280 溶液在234 nm 处有最大吸收峰,乳浊液则无最大吸收峰。T280 溶液在244 及220 nm 处的吸光度值相同,均为1. 14 ,而乳浊液在这两处的吸光度值分别为1. 61和3. 16 ,相差1. 54 。为了排除T280 对杜鹃油分析测定的影响,选取244 nm 为参比波长,220 nm 为测量波长,采用双波长分光光度法测定杜鹃油含量。
标准曲线及线性范围
配制一系列标准乳浊液,将乳浊液超声及静止处理后,然后分别在244 nm 和220 nm 处测定吸光度。以两个波长处吸光度的差值对乳浊液中杜鹃油浓度作图, 并进行线性回归, 其回归方程为: △A =0. 01245c + 0. 00535 ( R = 0. 9999 , n = 9) ,杜鹃油的浓度在0. 005～0. 8 g?L - 1的范围内线性关系良好。
方法回收率及精密度
配制一系列已知杜鹃油浓度的乳浊液,将乳浊液进行超声和静置后,采用双波长分光光度法测定吸光度,根据上述标准曲线计算杜鹃油含量,然后计算回收率。根据回收率的结果,计算出平均回收率为99. 92 % ,相对标准偏差为1. 64 %。
配制杜鹃油和T280 浓度分别为0. 103 和0. 0487 g/ L 的乳浊液,平行测定13 次进行精密度分析。通过计算,得出相对标准偏差为0. 98 %。
结论
本文针对采用挥发油测定法测定乳浊液中烈香杜鹃油的含量时,步骤比较繁琐,需要时间较长的问题,建立了双波长分光光度法测定乳浊液中烈香杜鹃油含量的分析方法。首先考察了超声处理、离子强度和p H 值对乳浊液吸光度的影响,在此基础上确定了测定的基本条件和标准曲线,烈香杜鹃油含量在0. 005～0. 8 g/ L 的范围内线性关系良好( R = 0. 9999 , n = 9) ,平均回收率为99. 92 % ,相对标准偏差为1. 64 %。该测定方法简便快速,结果准确。该分析方法的建立对于杜鹃油在水乳浊液中含量的快速测定,杜鹃油缓释制剂可控释放性能的研究有重要意义,而且为性质相似的其它油性药物在乳浊液中含量的测定提供了参考。