LUCY-2型化学发光仪即半自动化学发光免疫分析仪,是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合,用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫和酶免疫相似,不同之处是以发光物质代替放射性核索或酶作为标记物,并籍助自身的发光强度直接进行测定,光量子产额与标记物的量成正比,由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。相比之下化学发光免疫分析的灵敏度与可测范围远远高于酶免产品,同时具有放射免疫的高灵敏度,应用于甲状腺系统、肿瘤标记物、生殖系统等重要指标的测定,有高度的优越性,虽然它兼具ELISA法简便、快速的操作方法,但其每个环节都会对发光值产生影响,出现错误的结果。所以有必要对临床操作中可能出现的问题及其解决办法加以探讨。
1试剂的选择优良的检测试剂对于结果的准确性、重复性不容质疑。要选用认证的试剂,不要用无批号的试剂,最好选用与仪器配套的试剂.不要混用不同批号的试剂,更不可使用过期的试剂。 临床实验室
2环境的要求 为了保证实验的准确性,严格控制实验室温度在18—25℃,温度过高或过低影响发光值,影响实验结果。
3操作中存在的问题及处理方法
3.1加样
3.1.1可能出现的问题:
①血清分离不好或者待测标本污染或溶血。如果血清分离不好,标本中含有纤维蛋白丝就会附着于微孑L底部,干扰抗原抗体的反应,影响结果。标本溶血或者污染会使红细胞中过氧化酶释放出来,影响反应。细菌蛋白也会干扰实验结果。
②手工操作中,应避免试剂与标本的污染,特别是在加样过程中要戴上一次性手套,操作后彻底洗手,加样头不可混用,以免引起交叉感染。
3.1.2解决办法:
①用于测定化学发光的标本基本以血清和体液为主,但大部分是以血清为主,用正确的采血技术收集全血标本,37℃静置th,离心分离提取血清用于检测,采血后24 h内测定。若需要长时间保存,则应冻存于- 20℃以下,避免反复冻融。使用前恢复到室温,轻轻晃动摇匀,若标本有沉淀物形成,应离心出去方可使用。如标本需要稀释时,用洁净无菌的生理盐水稀释。
②加标本或工作液时应加在化学发光微孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。吸取标本与标准品的量应准确,吸头尖插入液面下的深度应一致。加酶结合物时吸头应悬空,避免因吸头碰到小孔边缘或者孔中试剂而造成酶结合物污染。
③从冰箱里取出试剂应于室温平衡后使用。
3.2 温育 LUCY-2型化学发光有两种方法:一步法和二步法。一般采用一步法,不论哪种方法,温育的时间应按规定力求准确。温育时间过短使结果偏低,过长将导致非特异性结合物吸附于微孔内,温箱的温度必须严格控制,过高过低都会影响发光值,造成错误的结果。最好使用固定的温箱,因为温育的温度有两种,一种是37℃,一种是24士2℃,如果反复调节温箱温度,将会影响实验结果。温育的过程中将微孔用封膜覆盖,避免边缘效应。
3.3 洗板用手工洗板时洗板要彻底,洗液应注满每孔,但不可用水过猛,避免孔与孔之间交叉,不能产生气泡,每次洗涤均应甩干孔内液体;用洗板机洗板时洗液不足可能导致洗板不彻底;洗板针堵塞,可能导致抽吸不完全,洗板不畅使效果变差。以上情况均可造成结果偏差。解决方法是洗板机每天使用时进行注液量和残液量的校正,使用完毕后用蒸馏水冲洗,保持管道畅通;洗涤时确认注满每个反应孔;洗涤后每个孔的残液量不得大于2 ul,最后将孔内液体拍干。
3.4测量使用发光仪之前要提前调出测量项目的程序,加入发光底物之后要在规定的时间内完成测量,测量时不可使发光底物液溢出孔外,避免污染仪器,测量完毕立即拿出板条,以免发光物挥发腐蚀仪器。
3.5定标 每更换一批试剂都要重新做一次标准曲线,力求曲线相关系数r值接近1.O的,定标曲线的期限是15 d,过期重新定标做曲线,如果标本量少的项目可以把标准品分装一部分冷冻- 20℃以下,以防标准品降解,影响结果。
此外,在实际操作中,发光反应的灵敏度很高,需要严格按照试剂盒内说明书进行实验操作,控制每步的反应时间,操作要紧凑,包被条打开后应将剩余包被条用封膜覆盖,装入袋中密封保存,以免受潮。只有做好以上所有的环节才能保证结果的准确性。