慢病毒滴度检测是检验慢病毒是否合格的方法之一。在一些特定的实验中,我们需要为病毒的浓度,即滴度,进行测定。由于慢病毒载体的不同以及客户需求的不同,有的慢病毒会带有荧光标记,而有的没有,故而滴度检测也有不同的方法。
一、ELISA法
传统的p24 ELISA可检测到293细胞在瞬时转染过程中产生的病毒相关p24和游离p24,而游离的p24可以占上清液中p24总量的很大一部分。因此,传统的p24 ELISA通常会高估存在的慢病毒的数量。
新的QuickTiter慢病毒滴度试剂盒(与慢病毒相关的HIV p24)可zui大程度地减少此问题。一项专有技术可在运行测定的ELISA部分之前,将慢病毒与溶液中的游离p24分离。
二、Real-time PCR法
GeneCopoeia的Lenti-Pac 慢病毒滴度检测试剂盒系列产品为简便、快速检测慢病毒颗粒的滴度而设计。试剂盒包含从RNA抽提到qRT- PCR检测过程的全套试剂,样品经过RNA抽提、DNase消化、反转录、qRT-PCR步骤即可确定慢病毒滴度。
特点:
1.能够判断慢病毒是否包装成功;
2.准确测定病毒拷贝数,以确保细胞转导和基因表达的效率;
3.提供滴度检测过程从病毒的RNA提取到qPCR检测所需要的试剂。
综上,慢病毒滴度检测:ELISA法结合qPCR法,想怎么测就怎么测~
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