Nanopro 100是Cell Biosciences公司开发的一款超微量蛋白分析仪,依赖于两项成熟的技术:毛细管等电聚焦分离技术(cIEF)和化学发光免疫检测技术实现对不同磷酸化状态和其他翻译后修饰的蛋白异构体进行分离和检测。cIEF基于等电点的差异实现了蛋白异构体的高分辨率分离,而化学发光免疫检测技术则能够对特异的蛋白异构体实现高灵敏度的检测。Nanopro 100系统仅仅需要25个细胞,就可以对诸如原代细胞、干细胞、肿瘤穿刺细胞、显微组织切片等的低丰度蛋白进行检测。所以Nanopro 100是当今进行信号转导和蛋白翻译后修饰研究的有力工具。
技术原理
l????????上样?LOAD
在毛细管中注入样品混合物、荧光标记的PI标准和电解质。
l????????分离?SEPARATE
在毛细管上加电压,进行等点聚焦(IEF)分离,单个的蛋白和PI标准会停留???在等电点处,记录毛细
管中每个标准位置。
l????????固定?IMMOBILIZE
UV照射毛细管,激活其特有的化学基团,将分离开的蛋白质异构体固定在毛细管避上
l????????免疫杂交?IMMUNOPROBE
毛细管经过清洗后,对特殊蛋白进行免疫杂交,二抗连接的HRP(辣根过氧化物酶)经抗体孵育后与特异的蛋白结合,然后加入化学发光底物,由CCD捕捉产生的化学发光信号。
l????????定量?QUANTITATE
软件分析数字化图像,定量分析结果。
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产品配置:
1.Nanopro 100系统
内含cIEF电泳场和化学发光级别CCD,其中电泳场含12跟毛细管,一次可进行12个样品的检测。
2.Compass软件
软件能够将获得的数据通过三种方式输出:图表、模拟的凝胶图像和数字化毛细管图像,图表中可显示各蛋白异构体的峰型并自动计算每种蛋白质亚型所占的百分比。软件还可以记录IEF分离过程,允许查看任何时候的分离图像。所有数据均可以导出用于文献发表或进一步数据库分析。
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产品应用:
????????Nanopro 100作为信号转导和蛋白翻译后修饰研究的有力工具,可以具体应有在以下领域:
????????药物研发——确认激酶抑制类药物的作用
????????生物标记物的发现和验证——探测疾病和治疗对蛋白翻译后修饰的影响
????????原癌基因的激活——在原代组织和细胞中直接研究原癌基因的调节机制
????????翻译后修饰的研究——检测细微等电点差距的蛋白异构体