Flipper-TR探针如何检测荧光寿命变化？



荧光Flipper-TR?探针通过特异性靶向细胞质膜，并通过其荧光寿命变化来反映膜张力变化。Flipper-TR?自发地插入细胞的质膜中，并且仅在插入脂质膜时才会激发荧光。探针通过机械载体上的两个扭曲的二硫噻吩之间的扭转角和J化改变来感知脂质双层膜结构的变化（参见图5）。当处于紧张状态时（二硫噻吩并排），发射寿命更长（4.1-8.0ns），而在松弛状态下（二硫噻吩扭曲），发射寿命短（2-4ns）。方差（cv）约为0.3ns（cv = 4-15％），这允许在分辨率细微变化的情况下进行高分辨率分析，在FLIM成像过程中，可将荧光寿命的差异通过时间来展示，一般来说，较短的寿命为绿色，中等寿命为黄色，较长的寿命为橙色和红色



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Flipper-TR的结构和张力检测机制示意图

左边：Flipper-TR的基本分子结构

右边：Flipper-TR低张力时扭曲（绿色）和高张力时并列排布（红色）



这些探针的滤光片组件是什么？



Flipper-TR探针使用长分离滤光片组进行可视化，因为其激发峰值比发射峰值短100 nm以上。因此，理想的滤光片组是488 +/- 20nm的激发波长和575-675 +/- 40nm的发射波长（图3）。时间分辨测量方法允许非常低的背景，它在水性环境中具有低荧光。



Flipper-TR探针在诸如组织培养基或固定缓冲液等水环境中的背景非常低，因为它是完全扭曲的状态，容易形成胶束并自我淬灭（参考文献3）。插入膜后，其扭曲度变小，开始发出高荧光。



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