基本克隆实验流程：取得更高效率的三个步骤

1.确定入门克隆
入门克隆?是您进行实验的方式和地点，因为它包含你的目的基因或 attL 序列插入的 DNA 片段，然后将其与 attR 序列重组以创建所需的表达克隆。选择一种我们的TOPO 克隆载体来构建您的入门克隆，或从经过验证的 Ultimate ORF 克隆库中购买预制克隆。

2.用克隆酶介导反应
一旦准备好入门克隆，就可以将目标基因轻松地导入第二个质粒，即目标载体。该反应由?LR Clonase 酶混合物介导，利用蛋白机制从入门克隆中切除目的基因，整合至目标载体中，然后用作您的表达克隆。其逆反应很简单：利用?BP Clonase 酶混合物进行 BP 反应（attB 和 atPP 位点之间的重组）。LR Clonase和 BP Clonase 酶混合物均采用易于使用的预混液形式，确保了反应之间的一致性和可靠性。

3.选择目标载体
将目的基因或 DNA 片段克隆到 Gateway 载体后，您可以根据需要将其导入多个目标载体中。
从大肠杆菌、酵母、昆虫或哺乳动物细胞中的蛋白表达到 RNAi 研究，从晶体学到蛋白与蛋白互作的功能研究，总有一种目标载体适合您的应用。对于需要特殊或定制载体的应用领域，Gateway 载体转换系统可以将任何载体转换为与 Gateway 克隆兼容的载体。

GeneCopoeia提供的 EZShuttle?重组克隆体系应用E.coli和λ噬菌体特异位点的重组酶促体系使 DNA片段在载体间相互转换，其原理与 Gateway克隆技术相同。
BP反应-构建入门载体：
通过PCR将attB位点添加到目的DAN序列两侧，形成attB-PCR产物。用attB-PCR产物或者含attB位点的供体质粒和含attP位点的质粒发生重组生成入门克隆。
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货号 名称 说明
RCBM-1002-020 EZRecombinase? BP Cloning Kit (20 rxn) Catalyzes attB x attP cloning（催化BP反应）
RCBM-1002-100 EZRecombinase? BP Cloning Kit (100 rxn) Catalyzes attB x attP cloning（催化BP反应）
LR反应-构建表达载体：
制作表达载体时，选择适合的目标载体非常重要。这种选择取决于许多因素，如宿主类型，所需的表达水平和实验目的。选定的attR表达载体与attL-入门载体重组以产生表达载体。
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货号 名称 说明
RCBM-1001-020 EZRecombinase? LR Cloning Kit (20 rxn) Catalyzes attL x attR cloning（催化LR反应）
RCBM-1001-100 EZRecombinase? LR Cloning Kit (100 rxn) Catalyzes attL x attR cloning（催化LR反应）

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商优保持着密切的合作关系，目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理，主要包括：AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等，可以在短时间内为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品及物流服务。?
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